短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats，STR)由于其在整個人類基因組中高度雜合性和多態(tài)性被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)實踐。近年來，常染色體STR基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫在個人識別和親權(quán)鑒定方面顯示出了強大的優(yōu)越性，成為國內(nèi)外研究最常用的技術(shù)之一。本研究是第一次對云南怒江白族常染色體的15個基因座進行報道，調(diào)查云南怒江白族人群的遺傳多態(tài)性，為該地區(qū)少數(shù)民族個體的法醫(yī)學(xué)鑒定提供遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，同時為法醫(yī)個人識別和親權(quán)鑒定提供參考，豐富國內(nèi)DNA數(shù)據(jù)庫。
1材料與方法
1.1材料
隨機采集云南怒江地區(qū)124名白族無關(guān)個體外周血，且證實三代以內(nèi)均居住于怒江地區(qū)。所有血樣均經(jīng)EDTA抗凝，保存于-20℃的環(huán)境下。
1.2方法
DNA的提取、擴增及基因分型:采取經(jīng)典的酚-氯仿有機法對血樣進行DNA提取，用美國ABI公司生產(chǎn)的AmpFISTRIdentifierTM試劑盒，復(fù)合擴增15個STR基因座(TPOX、D16S539、D3S1358、CSF1PO、D5S818、TH01、vWA、D7S820、D13S317、D8S1179、FGA、D21S11、D18S51、D19S433、D2S1338)及Amelogenin基因，用9700擴增儀(ABI公司)進行擴增，擴增步驟嚴格按照試劑盒要求進行操作，PRISM3130(ABI公司)遺傳分析儀進行毛細管電泳分離，STR片段的分離檢測用Analyzer軟件(ABI公司)。用GeneMapperIDv3.2Software軟件(ABI公司)對所得數(shù)據(jù)進行分析，得到分型結(jié)果。
1.3統(tǒng)計學(xué)處理
所有被用于法醫(yī)個體識別和親權(quán)鑒定的基因頻率和法醫(yī)學(xué)參數(shù)(包括多態(tài)性信息含量(PIC)，非父排除率(PE)，匹配概率(PM)，實際雜合度(H0)和期望雜合度(HE)，累積匹配概率(CMP)，累積非父排除率(CPE)累積個人識別能力(CDP))用Modified-PowerStats軟件(ABI公司)計算，用Arlequin3.5軟件 (ABI公司)進行Hardy-Weinberg平衡檢驗。遺傳距離通過Dispan計算，得出數(shù)據(jù)用MEGA4軟件做出系統(tǒng)進化樹。
2結(jié)果
124名怒江白族無關(guān)個體D3S1358、TH01、D21S11等15個常染色體STR基因座的基因分布均得到了滿意的分型結(jié)果，所得15個常染色體STR基因座等位基因和基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，P均大于0.05.多態(tài)信息含量、雜合度、個體識別能力、累積個體識別能力、非父排除率、累積非父排除率.15個常染色體STR基因座中，實際雜合度觀察值介于0.1613～0.3871之間，雜合度的期望值介于0.6129～0.8387之間.多態(tài)信息含量介于0.5112~0.8504之間.個體識別能力介于0.7448～0.9603之間，15個常染色體STR基因座的累積個人識別能力達到99.99%.非父排除率介于0.3067～0.6727之間，15個常染色體STR基因座的累積非父排除率達到99.99%.各基因座的匹配概率介于0.0447～0.2552，其累積匹配概率為4.8691×10-17.對云南怒江地區(qū)白族群體與云南獨龍、云南怒族、云南景頗族(數(shù)據(jù)未發(fā)表)和南方漢族等5個人群的遺傳距離作出比較.
3討論
STR在人基因組中出現(xiàn)的數(shù)目和頻率不同，從而表現(xiàn)出遺傳多態(tài)性。由于STR基因座在群體之間和群體內(nèi)部的異質(zhì)性水平較高，受到地理，語言等諸多因素的影響，所以在將STR應(yīng)用于人類群體學(xué)研究和法醫(yī)個體識別和親權(quán)鑒定時，必須對該群體進行多態(tài)性調(diào)查。且需雜合度(H)、多態(tài)信息量(PIC)、個體識別力(DP)等指標均符合較高遺傳多態(tài)性要求。本研究的PM=4.8691×10-17。同時在本群體中，15個STR基因座的累積個人識別概率和累積非父排除概率均高于0.9999。說明實驗所選擇的這15個常染色體STR遺傳標記在進行白族群體遺傳學(xué)研究和相關(guān)應(yīng)用研究時是極有價值的。
將云南怒江白族124名無關(guān)個體數(shù)據(jù)與已經(jīng)報道的云南獨龍族、云南怒族、南方漢族及未報道的云南景頗族的15個常染色體STR基因座遺傳距離進行比較，發(fā)現(xiàn)不同民族存在差異。在系統(tǒng)進化樹中看到景頗族與怒族出自同一支，而怒江白族與獨龍族和漢族出自另一支，他們在基因數(shù)據(jù)上更為相近。當?shù)氐牡乩憝h(huán)境和云南的歷史記錄也恰好說明這一結(jié)果的合理性。首先，怒江作為獨龍族主要聚居地，其地理環(huán)境與外界相對隔離封閉，這使怒江白族和獨龍族之間的交流融合更加頻繁和多樣化。其次，對于漢族，陸韌等認為歷史上漢族遷移云南的活動在很早以前就已經(jīng)出現(xiàn)，唐以前進入云南的漢人與當?shù)孛褡迦诤蠟椤鞍仔U”，而唐宋時期又有幾十萬漢人由于戰(zhàn)亂、饑荒、擄掠而進入云南，這批遷移者被南詔、大理統(tǒng)治者融合到白族之中。直至元代，云南與內(nèi)地的政治經(jīng)濟制度、生產(chǎn)關(guān)系和儒學(xué)文化氛圍等方面逐漸接近，進入云南的漢人能夠終元一代“保其世籍”不改，標志著云南漢族“白族化”傾向的基本中斷，走上了與云南各民族共同發(fā)展的道路。這個學(xué)說也剛好印證了此次研究所作出的系統(tǒng)進化樹。本研究所得數(shù)據(jù)亦可為漢族群體的起源遷徙變化作更進一步的了解，亦對云南怒江白族起個體識別和親權(quán)鑒定提供資料。