短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeat，STR)又稱微衛(wèi)星DNA，是一種可遺傳的不穩(wěn)定的并且具有高度多態(tài)性的短的核苷酸重復(fù)序列，在法醫(yī)學(xué)親子鑒定、個(gè)體識(shí)別及遺傳病連鎖分析等有廣泛應(yīng)用。STR核心序列的變異，可能導(dǎo)致對(duì)結(jié)果分析的偏差甚至誤判，因此引起法醫(yī)分子生物學(xué)和遺傳學(xué)工作者的重視。我們?cè)谟H子鑒定工作中發(fā)現(xiàn)STR基因座D2S1338、TPOX和D2S441同時(shí)發(fā)生遺傳突變的案例，且在D2S1338基因座發(fā)生了兩步突變，這在親子鑒定案例中極為罕見，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　對(duì)象與方法

1.1　對(duì)象

涉及標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)體1個(gè)案例，由被檢父、生母及其孩子自行委托進(jìn)行親子鑒定。每位受檢者采集靜脈血1mL，用EDTA抗凝，置于4℃冰箱保存。

1.2　方法

1.2.1　DNA提取　Chelex-100法提取血樣本基因組DNA。

1.2.2　PCR擴(kuò)增和電泳分型

用PowerPlex®21系統(tǒng)熒光標(biāo)記試劑盒復(fù)合擴(kuò)增Amelogenin基因座和20個(gè)STR基因座(D3S1358，D1S1656，D6S1043，D13S317，PentaE，D16S539，D18S51，D2S1338，CSFlPO，PentaD，TH01，vWA，D21S11，D7S820，D5S818，TPOX，D8S1179，D12S391，D19S433，F(xiàn)GA)。此外用PowerPlex®FusionSystem熒光標(biāo)記試劑盒復(fù)合擴(kuò)增Amelogenin基因座和22個(gè)STR基因座(D3S1358，D1S1656，D2S441，D10S1248，D13S317，PentaE，D16S539，D18S51，D2S1338，CSFlPO，PentaD，TH01，vWA，D21S11，D7S820，D5S818，TPOX，D8S1179，D12S391，D19S433，F(xiàn)GA，D22S1045)以及1個(gè)Y-STR基因座(DYS391)。PowerPlex®21系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示D2S1338和TPOX基因座不符合孟德爾遺傳規(guī)律，PowerPlex®FusionSystem熒光標(biāo)記試劑盒證實(shí)了PowerPlex®21系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果，但同時(shí)又發(fā)現(xiàn)了D2S441位點(diǎn)也存在突變，因此加測(cè)PowerPlex®Y23System，Y染色體上的23個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座(DYS5762，DYS389I，DYS4482，DYS389II，DYS19，DYS391，DYS481，DYS549，DYS533，DYS438，DYS437，DYS570，DYS635，DYS390，DYS439，DYS392，DYS643，DYS393，DYS458，DYS385a/b，DYS456和Y-GATA-H4)。用ABI3500Dx遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，通過(guò)GeneMapperID-X軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

1.2.3　統(tǒng)計(jì)分析

計(jì)算親權(quán)指數(shù)(paternityindex，PI)、累積親權(quán)指數(shù)(cumulativepaternityindex，CPI)及相對(duì)父權(quán)機(jī)會(huì)(relativechanceofpaternity，RCP)的計(jì)算參見文獻(xiàn)。按照司法部《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》判斷是否存在親緣關(guān)系。

2　結(jié)果

2.1　PowerPlex®21系統(tǒng)和PowerPlex®FusionSystem檢測(cè)系統(tǒng)在該認(rèn)定親子關(guān)系的案例中，均發(fā)現(xiàn)STR基因座D2S1338發(fā)生兩步突變，TPOX發(fā)生一步突變，PowerPlex®FusionSystem檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)D2S441發(fā)生一步突變。其余基因座分型結(jié)果符合遺傳規(guī)律。檢測(cè)系統(tǒng)分型結(jié)果及PI計(jì)算。

2.2　PowerPlex®Y23System基因座23個(gè)Y-STR基因座檢測(cè)的分型結(jié)果顯示爭(zhēng)議父親與小孩的單倍型分型結(jié)果相同。

2.3　數(shù)據(jù)分析根據(jù)人類遺傳規(guī)律，孩子的遺傳基因必然來(lái)自親生父母雙方。突變位點(diǎn)D2S1338基因座PI值計(jì)算：PI=0.00029，TPOX基因座PI值為0.00007，D2S441基因座PI值為0.0020。通過(guò)檢測(cè)所用PowerPlex®21系統(tǒng)、PowerPlex®FusionSystem熒光標(biāo)記試劑盒的24個(gè)STR基因座。常染色體STR基因座計(jì)算累積父權(quán)指數(shù)CPI為1222749807565.23，父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)為0.99999(大于99.99%)。同時(shí)檢測(cè)23個(gè)Y-STR基因座，分型結(jié)果符合父系遺傳規(guī)律。

3　討論

一般認(rèn)為STR的突變是由于在DNA復(fù)制過(guò)程中，DNA聚合酶發(fā)生滑脫，導(dǎo)致重復(fù)序列中核心序列重復(fù)次數(shù)的改變而出現(xiàn)突變。法醫(yī)物證學(xué)中常用的STR基因座突變率較低，一般在0.1%～0.5%，在《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》要求有3個(gè)或3個(gè)以上STR基因座的等位基因遺傳違反孟德爾遺傳規(guī)律，才能排除親權(quán)關(guān)系。根據(jù)孟德爾遺傳定律，孩子的全部遺傳基因必須分別來(lái)源于其生物學(xué)父母雙方，本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)D3S1358等24個(gè)STR基因座，除D2S1338、TPOX和D2S441外，均符合遺傳規(guī)律，并且上述三個(gè)基因座均定位于2號(hào)染色體，考慮孩子的2號(hào)染色體有可能存在單親二倍體且來(lái)源于母親的可能。若只有1個(gè)或2個(gè)通訊作者：曾昭書STR基因座違反孟德爾遺傳規(guī)律時(shí)，如果為單親鑒定則建議檢測(cè)孩子生母STR基因座分型，為避免因STR基因突變導(dǎo)致錯(cuò)誤地排除親子關(guān)系，應(yīng)增加遺傳標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)所測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，以排除或認(rèn)定親子關(guān)系。被檢父與孩子Y-STR分型一致表明二者可能來(lái)源于同一父系。本研究中通過(guò)PowerPlex®21系統(tǒng)、PowerPlex®FusionSystem熒光標(biāo)記試劑盒檢測(cè)24個(gè)STR基因座顯示D2S1338、TPOX和D2S441基因座不符合遺傳規(guī)律。同時(shí)PowerPlex®Y23System檢測(cè)23個(gè)Y-STR基因座，分型結(jié)果符合父系遺傳規(guī)律。D2S1338、TPOX和D2S441三個(gè)基因座均定位于2號(hào)染色體，考慮孩子的2號(hào)染色體有可能存在單親二倍體且來(lái)源于母親的可能，故該三個(gè)位點(diǎn)的親權(quán)指數(shù)不用來(lái)計(jì)算累積親權(quán)指數(shù)。

據(jù)報(bào)道突變存在明顯的性別差異。男女發(fā)生突變的比例為8：1，認(rèn)為突變與父親年齡相關(guān)，突變率隨父親年齡的增加而增加，男女突變率比值為5：1～6：1。本例中突變發(fā)生在父親的基因。雖本案例中該爭(zhēng)議父親的年齡僅27歲，除D2S1338、TPOX和D2S441外，均符合遺傳規(guī)律，并且上述三個(gè)基因座均定位于2號(hào)染色體，考慮孩子的2號(hào)染色體有可能存在單親二倍體且來(lái)源于母親的可能。