載脂蛋白的基本功能包括運載脂類物質(zhì)、激活脂蛋白代謝酶、識別受體等。APOC1基因主要在肝臟中表達，少量表達于肺、皮膚、睪丸和脾臟。rs4420638多態(tài)為位于19號染色體長臂上的APOE/C1/C4/C2基因簇內(nèi)的一個常見變異(A>G)，與血脂水平、慢性炎癥、冠心病等心腦血管病關(guān)系密切。本研究對廣西紅水河流域長壽群體的rs4420638進行分型，并分析其與血脂水平的相關(guān)性，以期了解該多態(tài)在長壽群體血脂代謝中的作用及其對壽命的可能影響。

1對象與方法

1.1研究對象

長壽組：496例，年齡≥90歲，祖居廣西紅水河流域(巴馬、鳳山、東蘭、都安);子女組：723例，年齡60～75歲，為長壽家系子或女;對照組：611例，年齡60～75歲，當?shù)亟】道先�。本研究的田野調(diào)查時間為2009年3-9月。

1.2方法

1.2.1血樣采集空腹抽取靜脈血8mL，其中5mL用于分離血清及血脂測定，余血用于DNA提取。

1.2.2血脂測定血清TC、TG采用酶法，HDL-C和LDL-C采用酶聯(lián)免疫一步法。

1.2.3基因分型采用熒光多重酶連接反應(yīng)(iMLDR)方法對rs4420638位點進行基因分型。引物：F：5’-ACTCCTCACAAGCCCTCCAATG-3’，R：5’-CAGCCCCTCATCTCGGGTAGA-3’。PCR反應(yīng)體系為10μL，包含1×buffer(Takara)、3.0mmol/LMg2+、0.3mmol/LdNTP、1UTaqpolymerase(QiagenInc.)、1μLDNA和1μLPCR引物(濃度1μmol/L)。反應(yīng)條件：(94℃20s，65℃40s，72℃1min30s)×11個循環(huán);(94℃20s，59℃30s，72℃1min30)×24個循環(huán)。PCR產(chǎn)物中加入1USAP酶和1UExonucleaseI酶，37℃溫浴1h，然后75℃滅活15min進行多重PCR產(chǎn)物純化。連接反應(yīng)結(jié)束后，在ABI3730XL測序儀上測序，確定基因型結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件分析，Hardy-Weinberg平衡采用擬合優(yōu)度χ2檢驗;正態(tài)分布的計量資料以x±s表示，組間比較采用協(xié)方差進行分析;非正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)即M(IQR)表示，組間比較采用秩和檢驗;分類資料的組間比較采用卡方檢驗;采用多元線性回歸(逐步法)分析血脂水平與基因型(AA=1，AG=2)、年齡、性別(男=1，女=2)、SBP、DBP、PP、BMI及FBG的相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1APOC1rs4420638基因型及等位基因頻率分布所有人群僅檢出基因型AA和AG，未發(fā)現(xiàn)純合突變基因型GG。3組人群的基因型及等位基因頻率分布無差異。

2.2各組人群APOC1基因rs4420638多態(tài)性對血脂水平的影響總體人群及對照組G等位基因攜帶者的TC、LDL-C水平高于非G等位基因攜帶者(均P<0.05)。性別分層后發(fā)現(xiàn)，總體人群及長壽組的女性G攜帶者的TC和LDL-C水平均高于非G攜帶者(分別為P<0.01，P<0.05)，對照組男性的G攜帶者的TC水平高于非G攜帶者，而對照組女性的G攜帶者的LDL-C水平高于非攜帶者。子女組男性和女性群體不同基因型間的血脂水平無明顯差異。

2.3血脂分層后APOC1rs4420638基因型對血脂水平的影響總體人群中，血脂正常亞組G等位基因攜帶者的TC和TG水平高于非G等位基因攜帶者(P=0.008和P=0.046);血脂異常亞組G攜帶者的LDL-C水平高于非G攜帶者(P=0.006)。長壽組和對照組中血脂正常和血脂異常亞組G和非G攜帶者的血脂水平無明顯差異;而在子女的血脂異常亞組中，G攜帶者LDL-C水平高于非G攜帶者(P=0.033)。

2.4APOC1基因與血脂水平的多元線性回歸分析在總?cè)巳汉蛯φ战M中，TC、LDL-C的水平與APOC1基因rs4420638基因型呈正相關(guān)，即AG基因型頻率越高，TC、LDL-C的水平越高;在子女組中HDL-C與APOC1基因型呈負相關(guān)，而在對照組中呈正相關(guān);TG水平在各組中均未顯示與基因型有相關(guān)性。另外，總?cè)巳汉透鹘M人群的TC、TG、LDL-C的水平多數(shù)尚與性別、DBP、BMI、FPG呈正相關(guān)，與年齡呈負相關(guān);HDL-C的水平與DBP呈負相關(guān)，與年齡、BMI、FPG、呈負相關(guān)。

3討論

本研究顯示，廣西紅水河流域壯族人群rs4420638G等位基因頻率約為0.09，稍低于華東漢族群體(0.12)�？傮w人群及對照組G攜帶者的TC和LDL-C水平明顯高于非G攜帶者，線性回歸分析也支持該變異與TC和LDL-C的相關(guān)性，提示了該變異對血脂代謝的不利影響，類似于東亞其他群體的結(jié)果。目前認為，APOC1可能通過以下途徑影響血脂水平：(1)抑制肝臟TG受體而減少富含TG的脂蛋白的攝取，致過多的TG轉(zhuǎn)化為LDL-C;(2)激活β-卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)，升高LDL-C水平;(3)抑制膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)的活性，減少膽固醇酯向LDL的轉(zhuǎn)化。因此，結(jié)合其他學者的研究，推測，當APOC1在rs4420638位點發(fā)生A>G變異時，上述過程將出現(xiàn)變化，例如APOC1的活性下降，對CETP的抑制減少，故LDL升高;肝TG受體解除抑制，肝TG攝取增多，并通過其他途徑轉(zhuǎn)化為LDL。令人迷惑的是，在長壽組女性中，G攜帶者也呈現(xiàn)類似的趨勢�？赡艿慕忉屖牵�長壽群體中性別比例過于懸殊(女多男少)及G攜帶者比較多所致。另外，性別分層后，各組女性群體的血脂水平亦普遍高于男性，說明血脂水平受性別影響較大。有報道稱，女性的血脂水平終生都受激素變化影響，尤其是絕經(jīng)期后的影響更為明顯。至于其他人群或亞組的G攜帶者沒表現(xiàn)出高的血脂水平，不排除另有其他未知的緩沖基因在抵消G變異的不利影響。