HLA系統(tǒng)是迄今所知人類基因中多態(tài)性最復雜的遺傳系統(tǒng)，其等位基因頻率及其連鎖不平衡特點在不同種族、民族、地域存在明顯差異。其多態(tài)性及分布差異是自然選擇造成的，它保證了種群能產(chǎn)生對各種病原體特異的免疫應(yīng)答，以維持群體的穩(wěn)定性。因此，一個群體高分辨水平的HLA多態(tài)性的研究對組織器官移植尋找合適供者、群體遺傳學、人類學和法醫(yī)學至關(guān)重要。全世界蒙古族人約為1000萬人，主要分布在中國、蒙古國(約280萬)、俄羅斯(約90萬)3個國家。中國的蒙古族人口為581萬人(2000年人口普查)，在我國少數(shù)民族人口里排列第6，其主要分布在內(nèi)蒙古自治區(qū)、東北三省、新疆、河北、青海，黑龍江地區(qū)蒙古族人口約14萬人。目前有關(guān)蒙古族HLA基因多態(tài)性在中國人群中的報道大部分是低分辨分型數(shù)據(jù)的研究，研究采用SBT分型技術(shù)對67例中國干細胞庫黑龍江地區(qū)蒙古族捐獻者進行HLA-A、B、DRB1高分辨分型，獲得HLA群體高分辨分型數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計分析得出其等位基因頻率及分布特征。

1材料與方法

1.1標本來源

67份標本來自黑龍江地區(qū)健康、無血緣關(guān)系、18～55周歲蒙古族造血干細胞捐獻者。

1.2主要試劑和儀器

TIANampBloodDNAKit血液基因組DNA提取試劑(美國Tiangen公司)，PCR-SBT基因分型試劑盒(德國ROSE公司)，BIO-RADPCR擴增儀，3730xlDNAAnalyzer測序儀。

1.3實驗方法

采用外周靜脈EDTA抗凝血樣，TIANampBloodDNAKit血液基因組DNA提取試劑提取基因組DNA。采用PCR-SBT方法，分別對HLAⅠ類基因A、B位點的第2、3和4外顯子正反方向及HLAⅡ類基因DRB1位點的第2外顯子正反方向測序，經(jīng)純化、測序，結(jié)果采用ATF-loader序列分析軟件進行分析，獲得高分辨分型結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學處理

1.4.1等位基因頻率及熵值(Entropy)的計算采用直接計數(shù)法和最大數(shù)學預(yù)期值算法(EM)通過Arlequin3.1軟件分別計算等位基因頻率和單體型頻率，同時對各基因位點作Hardy-Weinberg平衡檢驗。在HLA領(lǐng)域中，頻率分布的熵值是對1個或1組緊密連鎖的HLA基因座位多態(tài)性高低的度量，計算公式:E=-Σfi×log2fi(fi為HLA基因或單體型的頻率)。

1.4.2最小群體數(shù)量的估計為了得到可靠地單體型頻率，需要一定數(shù)量的群體。如果在由n個個體組成的群體中，某單體型只出現(xiàn)一次，該單體型頻率HP=1/2n，但并非所有頻率≥1/2n的單體型都是可靠的。由此在隨機人群中，如果要求有P的把握在群體中檢測到該單體型，所需要的群體最少數(shù)量為N，N=log(1-P)/log(1-2HP+HP2)。如果把P設(shè)置在95%區(qū)間，則N=-1.3010/log(1-2HP+HP2)。

2結(jié)果與分析

2.1HLA-A、B、DRB1等位基因頻率及熵值67份標本共檢測到HLA-A、B、DRB1基因座位上80種HLA編碼基因。HLA-A、B、DRB1基因座分別檢出等位基因20、37和23個。A、B、DRB1基因座HW吻合度的檢驗結(jié)果均為P>0.05，表明本研究來源群體的基因分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。各座位上等位基因頻率的分布情況顯示，E(B)>E(DRB1)>E(A)，表明HLA基因座位B、DRB1、A的多態(tài)性程度依次降低。

2.2最小群體數(shù)量的估計最小群體估計調(diào)查的群體樣本數(shù)為67人，只出現(xiàn)一次的基因型頻率為HP=1/(2×67)=0.007463。如果要使該數(shù)據(jù)的值有95%的把握可以檢出，那么至少需要調(diào)查的群體數(shù)為:N=log(1-P)/log(1-2HP+HP2)=200人，即至少要調(diào)查200人，才有95%的把握認為頻率為0.007463的單體型是可靠的。按此推論，調(diào)查67人可以有95%的把握認為單體型頻率大于0.022108是可靠的。小于此數(shù)值的單體型頻率，則需要在更大樣本的群體資料中進行估計。因此，討論的HLA-A、B、DRB1基因座中分別有15、20和14個等位基因有95%的把握認為單體型頻率是可靠的;有5、17和9個等位基因需要在更大樣本的群體資料中進行討論。

3討論

研究討論了黑龍江地區(qū)67例蒙古族人群的HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多態(tài)性及其分布情況，共檢測到80個HLA-A、B、DRB1等位基因，其中以B座位的多態(tài)性最為豐富，不僅是因為B座位比A、DRB1座位存在數(shù)目更多的等位基因，還因為B座位中常見等位基因并非處于絕對優(yōu)勢地位，其>0.1的常見等位基因累計頻率為0明顯

研究所得數(shù)據(jù)是我國少數(shù)民族基因多態(tài)性研究的重要補充，同時分析HLA-A，B，DRB1等位基因多態(tài)性的特征可為估計捐獻者資料的例數(shù)對患者查詢的滿足程度、與患者查詢的匹配幾率以及與移植成活或預(yù)后的關(guān)系等研究提供依據(jù)。